YTK12 Chemically Competent Cell

YTK12 Chemically Competent Cell

YTK12菌株是一个蔗糖转化酶(SUC2)缺陷型酿酒酵母。酵母蔗糖转化酶(SUC2)可将蔗糖或棉子糖水解成葡萄糖和果糖；参与碳水化合物分解代谢；可以两种不同的形式定位于细胞质并分泌到细胞外起作用，该基因的N端有一个外分泌信号肽，这个信号肽引导蔗糖转化酶分泌到细胞外起作用。YTK12菌株中的SUC2基因被突变，无法合成蔗糖转化酶，通过酵母质粒：pSUC2载体引入一个有功能的蔗糖转化酶基因，但是pSUC2空载体的N端信号肽被切除，无法分泌到胞外，把不同的待验证的多肽连接到SUC2蛋白的N端就可以验证连入的多肽是否有分泌功能。YTK12酵母菌株为SUC2基因缺陷型菌种，无法在以棉子糖为单一碳源的YPRAA 培养基上正常生长。只有将具有分泌活性的信号肽序列连接在 pSUC2载体蔗糖酶基因SUC2的N端，转化入YTK12酵母菌株中，才能使蔗糖转化酶正常分泌，YTK12 酵母才能将棉子糖转化为葡萄糖，在YPRAA 培养基上正常生长(Jacobs et al 1997，Oh et al 2009)。另外，蔗糖转化酶(SUC2)的水解产物葡萄糖可以将 2,3,5-三苯基四唑氯(TTC)还原为不溶的红色物质1,3,5-三苯基甲酸(TPF)，通过显色反应也可以判断待验证多肽是否有分泌功能。YTK12菌株筛选标记(Transformation marker)为：trp1，his3，ura3；YTK12感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存12个月，pSUC2质粒检测转化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

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