PichiaPink-2 Chemically Competent Cell

PichiaPink-2 Chemically Competent Cell

PichiaPink-2是毕赤酵母Pink菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。PichiaPink-2酵母适宜的生长温度是24-30℃，温度超过32℃对于细胞内的蛋白表达是毁灭性灾难，可能导致细胞的死亡。ADE2基因编码磷酸核糖甲酰胺咪唑羧化酶基因，该基因能够催化嘌呤核苷酸合成的第六步反应。在酿酒酵母，毕赤酵母，或者其他酵母中，这个基因的突变或缺失能够导致嘌呤前体在酵母细胞内液泡内的积累，使得细胞呈现粉红色。Pink2酵母菌株是ade2营养缺陷型，细胞内的ade2基因被缺失，部分ade2启动子也被缺失，所以菌株在缺乏腺嘌呤（adenine）的培养基中无法生长，而且在富培养基中生长缓慢。将含有ade2基因的表达质粒转化进入该菌株中后，能够使得菌株获得在腺嘌呤缺乏的培养基中生长，而且菌株颜色由 ade2基因缺失时的粉红色恢复为白色。从而间接的指明那些克隆菌株转化质粒成功。PichiaPink-2是pep4基因敲除酵母菌株。pep4基因编码蛋白水解酶A，是细胞液泡内的天冬氨酸蛋白酶，能够自激活。由于蛋白水解酶A对于细胞内液泡的其他蛋白水解酶类也起到很重要的作用，所以pep4基因敲除的菌株，其蛋白水解酶B活力也下降了，而且细胞内的羧肽酶Gama活性也丧失，这样可以保护表达产物免受降解，促进表达量的提高。

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