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pPIC3.5K载体
pPIC3.5K是一个鉴定多拷贝基因插入到毕赤酵母基因组中的载体。pPIC3.5K载体大小为9004 bp。在多克隆位点区域,拥有5个单一的限制性酶切位点:BamHI,SnabI,EcoR I,Avr II 和 Not I。胞内表达。载体构建时,需要包含一个ATG启动子,同时需要加入Kozak序列 (CavenerandStuart, 1991; Kozak, 1987; Kozak, 1990)毕赤酵母中使用HIS4 基因筛选。将基因插入GS115和KM71的AOX1中,需要使用SacI线性化质粒(GS115 产生的基因型为His+ Mut+,KM71酵母产生的基因型为His+ MutS)。将基因插入GS115和KM71的HIS4中,需要使用SalI线性化质粒(GS115产生的基因型为His+ Mut+,KM71 酵母产生的基因型为His+ MutS)。将基因插入GS115的AOX1基因中,也可以使用BglII 限制酶线性化质粒,产生的酵母基因型为His+ MutS。插入基因是必需包含起始密码子ATG。
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