载体构建

服务介绍

亚克隆和载体构建是基因工程中常用的技术手段，主要用于将目的基因插入到载体DNA分子中，构建成重组DNA分子。亚克隆是将DNA分子从一个载体转移到另一个载体的过程，通常采用限制性内切酶切割DNA分子，将目的DNA片段插入到另一个载体中。载体构建是将目的基因插入到已有的载体分子中，通常通过PCR扩增和限制性内切酶切割等技术实现。这些技术在基因工程、生物制药、农业生产等领域都有着广泛的应用，为研究人员提供了一种有效而可靠的重组DNA分子构建方法。

CRISPR/Cas基因编辑载体构建：

Cas9技术（CRISPR-Cas9）是一种源自细菌免疫系统的革命性基因编辑平台。它通过“向导RNA”精准定位，利用“Cas9蛋白”剪切DNA，实现了对生物基因组的高效、可编程修改。 它不仅推动了整个生命科学研究的飞速发展，更在疾病治疗、农业育种等方面展现出颠覆性的潜力。

发夹干扰载体构建：

RNA干扰（RNA interference，RNAi）是指生物体内由双链RNA诱发的基因沉默现象，最早是在线虫中被发现的。在植物RNAi的研究中，无论是未知基因功能验证还是已知功能基因的表达调控，构建相应的RNAi表达载体都是最基本的实验步骤和必要方法。 在RNAi研究中，通常通过向细胞内导入发夹RNA（hairpin RNA， hpRNA）来引起干扰，即在构建植物转基因的双元载体时，通过强启动子驱动一个“正向序列一环一互补序列”的转录单元进行转录，转录出的RNA可形成hpRNA， hpRNA通过DICER酶的作用，被加工成小干扰RNA （small interfering RNA， siRNA），这些siRNA与ARGONAUTE （AGO）等蛋白结合，形成RNA诱导沉默复合物（RNA-induced silencing complex， RISC），之后，siRNA与mRNA互补配对，RISC剪切、降解RNA分子，从而起到干扰基因表达的作用。

VIGS载体构建：

病毒诱导的基因沉默（Virus induced gene silencing，VIGS）是一种不依赖于转基因技术基因功能缺失研究方法，可以快速、高效地沉默目的基因，属于转录后水平的基因沉默（PTGS）。因而，对于无转化体系的植物来说，可以尝试利用VIGS技术来研究基因功能。基于烟草脆裂病毒（TRV）构建的VIGS体系是目前应用最为广泛的系统。所用到的双元载体为pBINTRA6（也写为pTRV1）和pTV00（pTRV2）。

过表达载体构建：

基因过表达技术是指将目的基因构建到组成型表达启动子、组织特异性启动子或目的基因自身的启动子下游，转入宿主后实现基因表达量升高的目的。在基因功能研究中，对研究未知基因功能、调控已知功能基因的表达及互补突变体基因功能等，构建相应的过表达载体都是最基本的实验步骤和必要方法。

服务优势

▶多年载体构建经验，能快速高效的帮您构建感兴趣的多种载体，极大程度为您节约时间成本，让您宝贵的时间花在刀刃上；

▶载体资源丰富，除了植物过表达相关载体构建服务外，也可提供酵母、大肠、昆虫和哺乳细胞多种载体；

▶基于无缝组装系统，对于单个、多个序列均可进行无缝组装；

▶可以与我司检测服务、蛋白服务等衔接，整个实验可以畅通且快速地完成。

服务流程

Cas9敲除载体构建

发夹干扰载体构建

VIGS载体构建

过表达载体构建

文案展示

Targeting specificity of nuclear-encoded organelle proteins with a self-assembling split-fluorescent protein toolkit

期刊：Journal of Cell Science

Schematic representation of the vectors generated (see Fig. S3 for details of cloning process).

适用领域

▶基因功能研究领域：是解析基因功能的核心技术支撑。通过构建含目的基因的表达载体（如将未知基因插入真核表达载体 pEGFP-C1），转染至细胞（如 HEK293 细胞）或导入模式生物（如拟南芥、斑马鱼），观察目的基因的表达定位、对细胞表型 / 生物生长发育的影响，进而明确基因的生理功能；也可构建基因敲除载体（如 CRISPR-Cas9 载体），通过抑制或删除目标基因，研究其功能缺失后的生物学效应。

▶生物制药研发领域：是重组蛋白药物、基因治疗药物研发的关键环节。一方面，构建重组蛋白表达载体（如将抗体基因插入 CHO 细胞表达载体 pCHO1.0、将胰岛素基因插入大肠杆菌载体 pET-28a），转入工程菌 / 细胞后大规模发酵，生产临床所需的抗体药物、细胞因子、激素等；另一方面，构建基因治疗载体（如腺相关病毒 AAV 载体、慢病毒载体），将治疗性基因（如修复缺陷基因的正常序列）导入患者细胞，用于遗传病、肿瘤等疾病的治疗。

▶农业生物工程领域：助力转基因作物培育与微生物农药研发。在作物育种中，构建含抗逆基因（如抗虫 Bt 基因、抗除草剂 EPSPS 基因）或优质性状基因（如高赖氨酸基因）的植物表达载体（如 pCAMBIA 系列载体），通过农杆菌介导或基因枪转化导入作物（如玉米、大豆、棉花），培育抗逆、高产、优质的转基因作物；在微生物农药研发中，构建含杀虫 / 抑菌基因的微生物载体（如苏云金杆菌表达载体），增强微生物对害虫 / 病原菌的防治能力。

▶工业酶与生物催化领域：支撑高效工业酶的生产与应用。将工业所需酶基因（如纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶基因）插入高效表达载体（如毕赤酵母载体 pPIC9K、枯草芽孢杆菌载体 pWB980），转入对应的工程菌株，通过发酵优化实现酶的高效分泌表达，用于纺织、食品、洗涤剂、生物能源（如纤维素降解产乙醇）等工业场景，降低生产成本、提高生产效率。