pBrige酵母三杂交

服务介绍

酵母三杂交技术是用酵母双杂交技术改进而来的，这套系统引进了一个能够同时插入两个外源蛋白的质粒pBridge。该质粒MCSI插入诱饵蛋白，N段仍然融合GAL4系统中DNA结合域BD，在MCSII中插入一个受PMET25启动子调控的外源蛋白。PMET25启动子特点是只有在甲硫氨酸缺乏的情况才能启动，使下游调控外面蛋白表达。同样将pBrige质粒转化到AH109菌株中，然后与转化到到Y187的文库工作液Mating涂板，筛选阳性克隆菌株。

服务优势

▶质粒体系升级，双外源蛋白精准承载；

▶PMET25启动子可控，实验干扰大幅降低；

▶经典菌株配对，筛选体系稳定高效；

▶可与我司其它互作实验进行衔接，整个实验可以畅通且快速地完成。

服务流程

文案展示

A plant NLR receptor employs ABA central regulator PP2C-SnRK2 to activate antiviral immunity

期刊：nature communications

Yeast three-hybrid (Y3H) assays showing the effect of Sw-5b NB on the interaction between NbPP2C4 and NbSnRK2.3 or between NbPP2C4 and NbSnRK2.4. Yeast cells were cotransformed with pGAD-NbPP2C4 and pBridge-NbSnRK2.3/2.4 + YFP or pGADNbPP2C and pBridge-NbSnRK2.3/2.4 + Sw-5b NB domain. The interactions were assayed on SD/-TL (lacking Trp and Leu) and SD/-TLHAM (lacking Trp, Leu, His, Ade, and Met) dropout medium plates, respectively, for 3–5 days.

适用领域

▶验证蛋白相互作用：检测三个蛋白之间是否存在相互作用；

▶研究蛋白复合物：分析多蛋白复合物的形成机制及功能；

▶探索信号通路：研究信号通路中多个蛋白的协同作用。