大肠基因编辑

服务介绍

大肠杆菌是重要的模式生物。普因特生物掌握成熟的大肠杆菌基因编辑技术，可为客户提供大肠杆菌基因敲除，大肠杆菌基因敲入，定点突变等全方位大肠杆菌基因编辑服务。技术核心包括λ-Red同源重组基因编辑、CRISPR基因编辑、结合二者优点的无痕基因编辑。

Red同源重组大肠杆菌基因编辑服务：

Red同源重组系统是来自lambda噬菌体的重组系统。该系统在pKD46载体表达Gam，Exo，Beta三个蛋白，实现将外源DNA同源重组到大肠杆菌基因组。该系统成熟高效，可以实现基因敲入、敲除。我们公司在Red重组系统的基础上加入Cre-loxP系统对插入的筛选抗性基因进行清除，基本实现无痕编辑。

CRISPR Cas9大肠杆菌基因编辑服务：

CRISPR Cas9定点切割基因组DNA，然后由Red重组酶进行修复。未能修复成功的大肠杆菌因基因组DNA断裂死亡，修复成功的个体即编辑成功的个体得以存活。CRISPR Cas9系统可以真正做到无痕基因编辑。与Red同源重组系统相比，CRISPR Cas9系统由于其独特的无标签筛选阳性克隆的机制，在进行需要很高精确度的定点突变中有较大优势。

iStop大肠杆菌基因编辑服务：

iStop技术是CRISPR CBE技术的应用。该技术不需要对DNA进行双链切割，也不会导致菌体死亡。该技术通过CRISPR的sgRNA将酶引导到大肠杆菌基因组的特定位置，造成该靶点位置的C>T突变。从而将CAA、CGA、CAG等数个密码子突变为终止密码子，导致基因翻译的提前终止。该技术基因敲除原理为基因产物不完整导致基因功能缺失。其优点在于对基因组仅进行极小的改动，对生物体的干扰非常小。且无需重组模板，构建周期短，成本较低。

服务优势

▶经验丰富：在大肠杆菌基因编辑领域有丰富的经验积累，经验丰富的团队可以帮助您快速完成大肠杆菌突变体构建；

▶三种实验方案，任意选择；

▶一站式解决方案：提供全面的上下游服务，包括大肠杆菌基因敲除及大肠杆菌回补实验验证；

▶质量保证：确保所有基因编辑位点都经过测序鉴定，以确保产品质量。

服务流程

文案展示

Gene editing by SSB/CRISPR-Cas9 ribonucleoprotein in bacteria

期刊：International Journal of Biological Macromolecules

SSB/CRISPR-Cas9 non-homologous and homologous recombination gene editing of the upp gene in E. coli MG1655.

(A) Results of plating different transformation systems. (B) PCR verification of non-homologous recombination gene editing transformants. WT, E. coli MG1655; 1–15, randomly selected transformants; uppΔ(43-267), upp gene with a deletion of 43 to 267 base pairs. (C) PCR verification of homologous recombination gene knockout transformants using ssODN donor. Δupp, knockout of the upp gene. (D) PCR verification of homologous recombination gene knockout transformants using tetRdsODN donor. Δupp::tetR, upp gene replaced by tetR. (E) Editing efficiencies of three transformation systems for the E. coli upp gene. Data are presented as mean ±standard deviation from nine independent experiments. Based on one-way ANOVA, **p < 0.01, ****p < 0.0001.

适用领域

▶基础研究与功能基因组学：研究单个基因功能，构建全基因组sgRNA文库，系统性研究基因与表型关系；构建营养缺陷型菌株（敲除必需基因）用于耦合筛选。

▶工业生物制造与代谢工程：敲除竞争或副产物途径，优化代谢流；敲除非必需结构基因，节约细胞资源；构建营养缺陷型耦合系统，加速菌株进化。

▶生物医药与治疗应用：改造益生菌（如EcN）为治疗蛋白表达平台；构建减毒疫苗株；开发“活体生物药”，如敲除基因并插入`ttr`簇增强定植。

▶工具菌株与模型构建：构建无抗性标记的基因工程系统；制备用于喂养模式生物（如线虫）的特定菌株。