酵母锰转运缺陷株互补验证

服务介绍

专为酵母锰代谢及转运蛋白功能研究设计，基于酵母异源互补实验原理。有专用锰缺陷型酵母菌株、表达载体，锰缺陷型菌株因缺失内源转运蛋白，在低锰环境中生长受抑。将目标转运蛋白基因转化菌株后，若蛋白有活性可回补缺陷表型，直观反映转运能力，排除其他阳离子干扰，适用于转运蛋白功能验证、锰代谢基因筛选及调控机制研究。△smf 菌株来源于BY4741酵母菌株，其缺失了对于锰离子具有高亲和性的内源基因△smf ，大大降低了对锰离子吸收转运能力。△smf 多用于锰离子转运蛋白的鉴定试验中，该菌株在基础培养基上可以正常生长，在含有高浓度二价阳离子螯合剂EGTA的培养基上生长较差。pDR196 是酿酒酵母蛋白高效表达载体，筛选标记为Ura3。将锰离子转运蛋白编码的基因X构建到pDR196 载体中，将其转化△smf 感受态细胞，X蛋白就会介导酵母细胞吸收锰离子，进而使得△smf酵母菌能够在缺少锰离子的培养基中正常生长。

服务优势

▶可检测蛋白是否具有锰离子吸收转运活性，简单高效。

▶本司有锰离子转运活性检测所需的全部试剂、菌株和载体。

服务流程

文案展示

Cadmium and iron transport by members of a plant metal transporter family in Arabidopsis with homology to Nramp genes

期刊：PLANT BIOLOGY

AtNramp genes complement a yeast mutant deficient in Mn uptake.Growth of smf1 yeast cells expressing AtNramp1, AtNramp3, or AtNramp4 on SD plates supplemented (Right) or not (Left) with 20 mM EGTA.smf1 yeast cells were transformed either with empty pDR195 or with pDR195 containing the cDNAs of AtNramp1, AtNramp3, AtNramp4 or of EIN2. Transformed strains were grown overnight in liquid synthetic dextrose-ura. The cultures were diluted to an OD of 0.1 and spotted on plates containing synthetic dextrose ura (pH 6). The plates were incubated at 30°C for 3 days before photography. 

适用领域

▶锰转运蛋白功能鉴定：鉴定植物、微生物、动物来源的候选锰转运蛋白基因的体内转运功能，明确目标基因是否具备介导锰离子跨膜吸收的核心活性，是基因功能验证的关键技术手段。

▶植物逆境生理研究：解析作物在缺锰、重金属胁迫等逆境下，锰转运蛋白在维持细胞内锰离子稳态中的作用；筛选耐低锰或锰高效利用的作物基因，为养分高效利用育种提供靶点。

▶微生物锰代谢机制解析：研究细菌、真菌等微生物的锰转运系统，明确锰转运蛋白在微生物适应锰匮乏环境、维持酶活性（如锰超氧化物歧化酶）中的调控机制。

▶锰转运蛋白突变体/变体功能筛选：对锰转运蛋白的不同突变体、等位变体进行功能验证，评估氨基酸位点突变对转运活性的影响，助力蛋白结构 - 功能关系研究。