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Ruby可视化蛋白互作验证试剂盒
Gal4-VP16-UAS系统:Gal4-VP16融合蛋白(Gal4:结合域,VP16:激活域)能够结合UAS序列元件,启动下游报告基因表达。将两个结构域分开表达,若两个结构域能在空间上接近,则形成完整蛋白,结合UAS并激活下游报告基因表达。 Ruby:ruby报告系统可表达3个酶蛋白(CYP76AD1、DODA、GT),三个酶蛋白将底物酪氨酸分解形成肉眼可见的玫红色的甜菜红素。而酪氨酸作为植物的天然底物不需要人为添加底物,即可原位显色。 uvGFP:uvGFP在365nm激发光源下可产生肉眼可见的绿色荧光,该荧光比eGFP强几十倍,观察时无需滤光片。 互作验证:ruby报告基因前面构建有5xUAS序列。将蛋白A与Gal4融合表达,蛋白B与VP16融合表达,若A与B能形成互作,拉近Gal4-VP16形成完整蛋白,结合到5xUAS序列上,启动下游ruby基因表达,形成肉眼可见的玫红色色素。此外,报告载体上面还有uvGFP表达框。uvGFP基因前面为组成性强启动子,可作为内参,用于参考瞬时转化是否成功。
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