KM71H Chemically Competent Cell

KM71H Chemically Competent Cell

KM71H菌株是invitrogen公司开发专门用于重组蛋白表达的毕赤酵母菌株。KM71H可以表达HIS4基因，不可利用营养缺陷培养基筛选重组成功的阳性菌落；pPICZ A, B, C，pPICZα A, B, C等具有Zeocin抗性基因的毕赤酵母表达质粒可使用100ug/ml的Zeocin或盐酸博来霉素进行筛选。KM71H毕赤酵母的表型为MutS, Arg+，Arg+表示KM71H的亲本菌在精氨酸琥珀酸裂解酶基因（arg4）有突变，在AOX1基因位点引入野生型ARG4基因同时破坏了AOX1基因，产生了MutS表型；MutS表示KM71H的AOX1基因功能被破坏（毕赤酵母是甲醇营养型酵母，可利用甲醇作为唯一碳源。甲醇代谢的第一步是：醇氧化酶利用氧分子将甲醇氧化为甲醛，毕赤酵母中有两个基因编码醇氧化酶：AOX1、AOX2，野生型毕赤酵母中大多数的醇氧化酶是 AOX1基因产物，甲醇可诱导 AOX1基因表达，AOX1蛋白产物最高可占细胞中可溶蛋白的30%以上，很多毕赤酵母表达质粒正是利用AOX1表达框进行外源基因表达的，若毕赤酵母含有有功能的AOX1基因就称为Mut+型；AOX2是AOX1的同源基因（97%的同源性），在缺失AOX1基因或AOX1基因丧失功能时，AOX2基因会发挥作用，产生一种表型为MutS的突变株，但AOX2基因氧化甲醇的能力比AOX1弱很多，结果是细胞代谢甲醇的能力下降，在甲醇培养基中生长缓慢。针对具体的蛋白，很难预测选择Mut+还是MutS作为宿主进行蛋白表达更好，虽然Mut+型酵母转录得到的mRNA更多，但超量的mRNA并不一定可以产生有活力的蛋白质；MutS型酵母虽然生长缓慢，转录得到的mRNA比Mut+少，但有可能更有利于蛋白形成正确构象，产生有活力的蛋白质）。KM71H化转感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存12个月，线性化的pPICZ A质粒（3.3kb，ZeocinR in E.coli/ Pichia pastoris）检测转化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

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