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2×同源重组酶
Quick Clone是一种等温无缝克隆酶，其反应体系包含T5核酸外切酶，高保真DNA聚合酶和Taq DNA连接酶。T5核酸外切酶具有很强的5' → 3'的核酸外切酶活性，酶切克隆片段产生3' 端突出的粘性末端，同源末端之间会进行碱基互补配对，随后高保真DNA聚合酶按照5' → 3'方向填补间隙。Taq DNA连接酶在缺刻处将5'磷酸和3'羟基连成磷酸二酯键。通过Quick Clone组装可以将一个或多个插入片段定向、快速、准确地插入到线性化载体中，最终构建的重组克隆无任何额外的碱基序列残留。Quick Clone 没有酶切位点的限制，线性化载体可通过限制性内切酶酶切或通过PCR的方法直接制备，在插入片段的两个PCR引物的5' 端引入与载体克隆位点两端完全相同15~25bp的重叠序列充当同源臂。带有同源臂的插入片段和线性化载体按一定比例混合后，在重组酶的催化下，50℃反应15 - 20 min即可转化。
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