酵母单杂交

服务介绍

酵母单杂交技术是在酵母双杂基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具，被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控，如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析DNA结合结构域信息等。

pHis2系统酵母单杂交：

pHis2酵母单杂交系统选用pHis2和pGADT7-Rec2两种质粒配套使用。质粒pHis2的筛选标志为Trp，用于表达pBait-His2 construct(启动子全长克隆到 pHis2中)；质粒pGADT7-Rec2的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C端 768~881位氨基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。当猎物蛋白(Prey)结合到诱饵序列(BaitDNA)上，GAL4 AD就会激活 HIS的表达，能够在含有3-AT的培养基上生长，从而确定DNA和蛋白有相互作用，主要适用于研究启动子全长与转录因子互作关系。

pAbAi系统酵母单杂交：

pAbAi酵母单杂交系统选用pAbAi和pGADT7两种质粒配套使用。质粒pAbAi的筛选标志为Ura，用于表达pBait-pAbAi construct(1~3 个bait DNA序列重复串联后克隆到pAbAi中)；质粒pGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C端 768~881位氨基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。当猎物蛋白(Prey)结合到诱饵序列(BaitDNA)上，GAL4 AD就会激活 AbAi的表达，能够在含有AbA的培养基上生长，从而确定DNA和蛋白有相互作用，主要适用于研究启动子顺式作用元件与转录因子互作关系。

pLacZi系统酵母单杂交：

pLacZi酵母单杂交系统选用pLacZi和pB42AD两种质粒配套使用。质粒pLacZi的筛选标志为Ura，用于表达pBait-pLacZi construct(启动子全长或1~3 个bait DNA序列重复串联后克隆到pLacZi中)；质粒pB42AD的筛选标志为Trp，在以半乳糖为碳源的情况表达AD与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。当猎物蛋白(Prey)结合到诱饵序列(BaitDNA)上，AD就会激活LacZi的表达，能够在含有X-gal的培养基上显色，从而确定DNA和蛋白有相互作用，主要适用于研究启动子顺式作用元件与对酵母生长有毒性的转录因子互作关系。

服务优势

▶多年文库构建经验，有效保证文库质量；

▶三框均一化技术，有效保证文库基因正确翻译和基因覆盖均一度；

▶一站式辅助生信分析，得到可靠的实验结论；

▶直接检测蛋白质之间的相互作用，而不依赖于其他分子或细胞的参与；

▶可通过报告基因的表达水平定量评估蛋白质相互作用的强度，进一步了解相互作用的动力学和功能。

服务流程

酵母单杂交文库构建

酵母单杂交文库筛选

酵母单杂交验证

文案展示

(1) pHis2系统酵母单杂交

Identification and characterization of TCP transcription factor GmTCP670 associated with soybean development

期刊：Scientific Reports

Y1H assay of the interaction between GmTCP670 transcription factor and GGNCCC. (A) Diagrams of pGADT7+GmTCP670 prey vectors. (B) Diagram of pHIS2+GGNCCC bait vectors. (C) Y1H validation of

GmTCP670 binding to GGACCC.

(2) pAbAi系统酵母单杂交

An InDel in the Promoter of Al-ACTIVATED MALATE TRANSPORTER9 Selected during Tomato Domestication

Determines Fruit Malate Contents and Aluminum Tolerance

期刊：The Plant Cell

(A)Diagram of the Sl-ALMT9 genomic region. Arrows indicate W-box in the promoter and the eighth W-box circled with a black box indicates the location of indel_3. The red boxes represent the coding regions. The thin red line and thick red line represent the introns and 39 UTR, respectively. (B) Diagram of the sequence of the eighth W-box in the Sl-ALMT9HMH and Sl-ALMT9LMH genotypes, respectively. (C) Yeast-one hybrid (Y1H) assay of Sl-WRKY42 binding to Sl-ALMT9 promoter fragments. The bait vectors Sl-ALMT9HMHpro and Sl-ALMT9LMHpro (the fragments containing the region 1523 bp upstream of the Sl-ALMT9 initiation codon) and the prey vector containing Sl-WRKY42 were introduced into yeast strain Y187, and interaction between bait and prey enhanced ABA resistance. Yeast cells were grown on SD-Leu media with various concentrations of ABA (0, 10, 15, and 20 mM). The bait vector (Sl-ALMT9HMHpro and Sl-ALMT9LMHpro) + pGADT7 were also transformed into Y187 as a negative control.

(3) pLacZi系统酵母单杂交

The bHLH transcription factor PIL1 orchestrates starch synthesis in key cereal crops

期刊：nature communications

Yeast one-hybrid assay showing that TaPIL1-5D bound the E-box other than mE-box (mutant E-box) motif.

适用领域

▶转录因子研究：酵母单杂交可用于研究转录因子与DNA序列的特异性结合。通过构建诱饵包含启动子或增强子序列，并与猎物中的转录因子相互作用，可以鉴定和验证转录因子-基因调控序列的相互作用关系。

▶DNA结合蛋白鉴定：酵母单杂交可用于鉴定与特定DNA序列相互作用的蛋白质。通过构建诱饵包含DNA结合序列，与猎物中的蛋白质相互作用，可以筛选和验证与该DNA序列特异性结合的蛋白质。

▶药物筛选与发现：寻找靶向特定转录因子-DNA相互作用的药物，尤其适用于那些传统上难以成药的转录因子靶点。