酵母双杂交

服务介绍

酵母双杂交及系统是一种鉴定和检测蛋白质相互作用的研究方法，因其具有灵敏性高、功能强大、适用范围广等特点，现已被应用于多个研究领域。

核系统酵母双杂交：

核系统酵母双杂交技术最初由Fields等人在研究酵母转录因子GAL4性质时建立，后续经过不断改进已发展成为一种成熟的蛋白-蛋白互作研究工具，具有简便、灵敏、可反映蛋白在活细胞内互作真实情况的特点，被广泛应用于互作蛋白的筛选、蛋白相互作用的鉴定/验证、蛋白互作机理的探究、蛋白连锁图谱绘制等工作。

膜系统酵母双杂交：

DUALmembrane技术在传统的酵母双杂交系统的基础上，巧妙地利用分离的泛素系统(split-ubiquitin) 进行蛋白质相互作用的筛选；泛素作为降解信号分子，人为分成两部分：N端 (Nub)，C端 (Cub)，互补重构的完整泛素分子可被泛素专一性蛋白酶(UBPs)识别，从而导致与泛素相连的蛋白被酶解。

全能型酵母双杂交：

DUALhunter 系统是在 DUALmembrane 系统技术的基础上，做了适当的修改，将诱饵蛋白通过Ost1膜锚定结构将非膜结构蛋白锚定在细胞膜，适用于浆蛋白、膜蛋白、细胞器蛋白、自激活蛋白。此技术的推出更大程度地扩大了酵母双杂交的应用范围。

服务优势

▶多年文库构建经验，有效保证文库质量；

▶三框均一化技术，有效保证文库基因正确翻译和基因覆盖均一度；

▶一站式辅助生信分析，得到可靠的实验结论；

▶直接检测蛋白质之间的相互作用，而不依赖于其他分子或细胞的参与；

▶可同时筛选和鉴定多个蛋白质间的相互作用，实现高通量的筛选和分析；

▶采用多个筛选步骤，如报告基因的验证和酵母菌株的双重选择，可以减少非特异性相互作用的假阳性结果；

▶可通过报告基因的表达水平定量评估蛋白质相互作用的强度，进一步了解相互作用的动力学和功能。

服务流程

酵母双杂交文库构建

酵母双杂交文库筛选

酵母双杂交验证

文案展示

(1) 核系统酵母双杂交

Tuber mustard BjuFIP gene negatively regulates plant sensitivity to abscisic acid 

期刊：Scientific Reports

Protein motif analysis of BjuFIP and the interaction analysis of BjuFIP with 3 BjuASK1 in Y-2-H and BiFC assays.4 (A) Protein motif analysis of BjuFIP. FBOX domain: a receptor for ubiquitination targets. 5 (B) The F-box protein BjuFIP was found to interact with BjuASK1 by Y-2-H growth 6 assay performed on SD media lacking Leu and Trp (-WL) and Ade, His, Leu, and Trp 7 (-WLHA). Saturated cultures were spotted onto SD media lacking Ade, His, Leu, and 8 Trp (-WLHA) at different dilutions (OD600=1, 0.1, 0.01, and 0.001). The vectors AD-T 9 and BD-53 were used as positive controls and the emptyvectors AD and BD were used 10 as negative controls.

(2) 膜系统酵母双杂交

A Bacterial-Type ABC Transporter Is Involved in Aluminum Tolerance in Rice

期刊：The Plant Cell

DUALmembrane system. STAR1 and STAR2 were fused to the C-terminal half (Cub) and the mutated N-terminal half (NubG) of ubiquitin,respectively. Yeast cells were cotransformed with various plasmid combinations as indicated at the right and were grown on SD medium without Leu and Trp as a control (left panel) or on a selective medium for protein interaction (right panel) without Leu, Trp, His, and Ade and containing 10 mM 3-aminotriazole at different concentrations (10 times dilution from left side). All plates were grown for 3 d at 30℃.

(3) 全能型酵母双杂交

An Arabidopsis Dual-Localized Pentatricopeptide Repeat Protein Interacts with Nuclear Proteins Involved in Gene Expression Regulation

期刊：The Plant Cell

Yeast two-hybrid–like assays show that PNM1 interacts with NAP1 and TCP8. Yeast cells were cotransformed with X-Cub and Nub-X constructs. Liquid cultures of double transformants are plated at DO600 = 0.1 and at increasing 103 and 1003 dilutions of the cultures (black triangles) on synthetic dropout selective medium that lacked Leu, His, adenine and Trp supplemented with 10 mM 3-amino-1,2,4-triazole. NubWT represents the nonmutated form of the N-terminal part of

ubiquitin and was used here as a positive control for interactions with Cub constructs.

适用领域

▶蛋白质相互作用研究：酵母双杂交技术广泛应用于研究蛋白质之间的相互作用网络。通过识别和验证蛋白质间的相互作用关系，可以揭示蛋白质复合物的组成和结构，从而深入了解细胞信号传导、转录调控、代谢途径等生物过程。

▶蛋白质功能研究：通过酵母双杂交技术，可以研究蛋白质的功能和调控机制。例如，通过识别蛋白质与转录因子、核酸结合蛋白等的相互作用，可以了解蛋白质在基因调控中的作用，以及调控网络的建立和维持。

▶进化生物学研究：酵母双杂交技术可以用于研究物种间的蛋白质相互作用。通过比较不同物种中的相互作用网络，可以了解蛋白质相互作用的进化变化，探究物种适应性和进化的基础。