YchemH酵母三杂交

服务介绍

YChemH-小分子三杂交系统，是一种基于已建立的酵母双杂交(Y₂H) 技术而来的小分子化药分析技术，用于药物靶标筛选鉴定的技术方法。利用感兴趣的小分子或药物作为诱饵来筛选从任何类型细胞、组织或生物体制备的高度复杂的蛋白质结构域文库。由于从DNA结合域(DBD)和激活域(AD)部分重构了活性转录因子，因此可以用作鉴定药物-蛋白质相互作用。小分子三杂交系统最初起源于利用具有细胞通透性的聚化小分子化学诱导剂（CIDs）来促进哺乳动物细胞嵌合受体的寡聚化。当“药物-靶蛋白“相互作用发生时，由于标签-ABD相互作用，标记药物消弭了DBD和AD之间的差距。这使得报告基因的表达和酵母在选择性培养基上的生长成为可能，通过测序分析阳性克隆以鉴定靶蛋白。

服务优势

▶直接在酵母活细胞中验证相互作用。这保留了真核细胞的蛋白质折叠、翻译后修饰等生理环境，避免了体外纯化蛋白导致的构象改变或功能失活，因此能检测到更接近真实生理状态的结合；

▶服务无需预先纯化目标蛋白，而是通过将cDNA文库转入酵母，直接筛选整个细胞内的蛋白质组。这意味着即使是低丰度的蛋白质也有机会被筛选出来；

▶实验结果可靠、图片美观；

▶主要依赖基础的酵母培养和分子生物学设备，对于学术实验室而言，技术门槛和资源消耗通常低于需要大型质谱仪器的化学蛋白质组学方法。

服务流程

文案展示

MNK2 deficiency potentiates β-cell regeneration via translational regulation

期刊：NATURE CHEMICAl BIOLOGY

Validation of the zebrafish Mnk2b–CID661578.6 interaction with different concentrations of CID661578.6 bait and two different DHFR hook vectors. Experiments using the original hook vector, N-LexA–DHFR-C, are listed as 1, 2 and 3. Experiments using the modified vector with the reverse order, N-DHFR–LexA-C, are listed as 4, 5 and 6. Both full-length zebrafish Mnk2b (3 and 6) and a fragment (2 and 4) corresponding to the original fragment of the human MNK2 identified in the screen were used. Human MNK2 was used as a positive control (1 and 4), and zebrafish Mnk2b only mediated binding when expressed by the hook vector with the reverse order (5 and 6) to the one used in the original screen (explaining why zebrafish Mnk2b did not show up as a hit in the original screen).

适用领域

▶检测化合物和蛋白的互作；

▶药物靶标验证与二次确认；

▶化合物与靶蛋白特异性互作验证；

▶化合物调控蛋白-蛋白互作的验证。