GUS染色及定量检测

服务介绍

启动子是位于基因5’端上游的DNA序列，能指导RNA聚合酶与DNA的正确结合、活化RNA聚合酶、募集相应的转录因子形成特异性转录起始复合体等，进而决定转录的方向和效率，是基因表达调控的重要顺式元件。启动子的表达模式及强度只能通过报告基因来检测，目前在植物启动子的研究中常用的报告基因有伊葡萄糖昔酸酶基因（GUS）。GUS基因编码β-葡萄糖醛酸乙酰转移酶，属水解酶类，在适宜的条件下，该酶可将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖苷酸酯（X-Gluc）水解生成蓝色产物。同时，GUS能与底物4-甲基伞型酮-β-葡萄糖醛酸苷（MUG，分子量352.3）反应产生荧光物质4-甲基伞型酮（MU，分子量198.2）。MU的激发波长为365nm，发射波长为456nm，其含量可由酶标仪测出。因此，我们可以根据单位质量的植物总蛋白在单位时间内产生的荧光物质的多少来定量的检测GUS含量。

服务优势

▶多年样本处理与染色经验，有效保证染色信号清晰、背景干扰低；

▶优化的染色与定量体系，有效保证组织/细胞染色定位精准度与定量结果重复性；

▶一站式辅助实验设计与生信分析，结合基因表达模式得到可靠的功能验证结论；

▶直接可视化报告基因表达位置，直观反映目的基因的时空表达特征，无需依赖间接标记物；

▶可同时实现多批次样本的定性染色与定量检测，兼顾高通量筛选与精细化验证；

▶采用染色梯度优化、阴性对照设置及重复实验验证等多重质控，显著降低假阳性结果；

▶可通过酶活定量检测评估GUS蛋白表达水平，进一步关联目的基因的表达丰度与功能活性。

服务流程

文案展示

The GUS reporter-aided analysis of the promoter activities of Arabidopsis ACC synthase genes AtACS4, AtACS5, and

AtACS7 induced by hormones and stresses

期刊：Journal of Experimental Botany

GUS expression of AtACS4TGUS (A), AtACS5TGUS (B), and AtACS7TGUS (C) recombinant transgenes in the developing transgenic plants. (a) 3-d-old etiolated seedling, (b) 1-week-old light-grown seedling, (c) 2-week-old light-grown plant, (d) 4-week-old light-grown plant, (e) rosette leaves of an adult plant with a 1 cm long inflorescence located at the centre of the rosette as indicated by an arrow. The numbers in panels (d) and (e) indicate the order of leaf appearance. The GUS staining method is described in the Materials and methods.

适用领域

▶分析基因的启动子表达的时空性和表达强度。

▶通过组织化学染色来做启动子活性的定性分析，还可以做启动子活性的定量检测。

▶鉴定启动子的顺式作用元件。