酵母钠转运缺陷株互补验证

服务介绍

专为酵母钠代谢及转运蛋白功能研究设计，基于酵母异源互补实验原理。有钠缺陷型酵母菌株、表达载体及配套试剂，钠缺陷型菌株因缺失内源转运蛋白，在高钠环境中生长受抑。将目标转运蛋白基因转化菌株后，若蛋白有活性可回补缺陷表型，直观反映转运能力，排除其他阳离子干扰，适用于转运蛋白功能验证、钠代谢基因筛选及调控机制研究。AXT3K酿酒酵母菌株为Na⁺/钠离子缺陷型菌株，其缺失了内源的质膜Na⁺逆向转运蛋白NHX1以及Na⁺外排蛋白NHA1和ENA1-4，丧失了转运Na⁺的能力。AXT3K多用于Na⁺转运蛋白的鉴定试验中，也可用于Na⁺通道或钠钾离子泵的鉴定。该菌株对Na⁺特别敏感，在含有50mM NaCI的培养基上生长，其生长受到明显抑制。pYES2是酿酒酵母蛋白高效表达载体，筛选标记为Ura3。GAL1启动子，需要利用半乳糖诱导蛋白表达。将 Na⁺转运蛋白基因X构建到pYES2 载体中(pYES2-X)，将其转化AXT3K感受态细胞，X蛋白就会介导酵母向培养基中排出多余的钠离子，进而使得AXT3K酵母菌能够在高钠AP培养基中正常生长。

服务优势

▶可检测蛋白是否具有钠离子吸收转运活性，简单高效。

▶本司有钠离子转运活性检测所需的全部试剂、菌株和载体。

服务流程

文案展示

Reconstitution in yeast of the Arabidopsis SOS signaling pathway for Na homeostasis

期刊：PNAS

SOS2 and SOS3 increase the NaCl tolerance of yeast expressing the SOS1 ion transporter. AXT3K cells transformed with an empty vector (control) or expressing the indicated combination of Arabidopsis genes were grown overnight in liquid AP medium with 1 mM KCl. Five microliters of serial decimal dilutions were spotted onto plates of the same medium or supplemented with 70 mM NaCl. Plates were incubated at 28°C and photographed after 4 days. Plasmids used for expression of the SOS proteins were: pSOS1–1 for SOS1; pFL2T for SOS2; pFL3T for SOS3; pFL32T for SOS2 and SOS3; and pFL2△T for SOS2T D△308.

适用领域

▶钠转运蛋白功能鉴定：鉴定植物、微生物、动物来源的候选钠转运蛋白基因的体内转运功能，明确目标基因是否具备介导钠离子跨膜吸收的核心活性，是基因功能验证的关键技术手段。

▶植物逆境生理研究：解析作物在缺钠、重金属胁迫等逆境下，钠转运蛋白在维持细胞内钠离子稳态中的作用；筛选耐低钠或钠高效利用的作物基因，为养分高效利用育种提供靶点。

▶微生物钠代谢机制解析：研究细菌、真菌等微生物的钠转运系统，明确钠转运蛋白在微生物适应钠匮乏环境、维持酶活性（如钠超氧化物歧化酶）中的调控机制。

▶钠转运蛋白突变体/变体功能筛选：对钠转运蛋白的不同突变体、等位变体进行功能验证，评估氨基酸位点突变对转运活性的影响，助力蛋白结构 - 功能关系研究。