酵母钾转运缺陷株互补验证

服务介绍

专为酵母钾代谢及转运蛋白功能研究设计，基于酵母异源互补实验原理。含专用钾缺陷型酵母菌株、高效表达载体及配套试剂，缺陷型菌株因缺失内源钾转运基因，在低钾环境中生长受阻。将目标转运蛋白基因转化菌株后，有活性的蛋白可回补缺陷表型，直观反映钾离子转运能力，排除其他阳离子干扰，适用于转运蛋白功能验证、钾代谢相关基因筛选及调控机制研究。R5421 酿酒酵母菌株为K⁺/钾离子缺陷型菌株，其内源的两个钾离子转运基因(TRK，2)被突变，在文献中也称为CY162，多用于K⁺/钾离子转运蛋白的鉴定试验中，也可用于K⁺/钾离子通道或钠钾离子泵的鉴定。Transformation marker 为:Ura3，Leu2。该菌株可以在含有 100mMKCI 的培养基中正常生长，在含 有5-10mMKCI的培养基中生长缓慢，当培养基中KCI浓度低于0.5mM，R5421细胞停止生长。pYES2 是酿酒酵母蛋白高效表达载体，筛选标记为Ura3。GAL1启动子，需要利用半乳糖诱导蛋白表 达。将K⁺转运蛋白基因X构建到pYES2 载体中(pYES2-X)，将其转化R5421感受态细胞，X蛋白就会介导酵母从培养基中吸收钾离子，进而使得R5421酵母菌能够在低钾AP培养基中正常生长。

服务优势

▶可检测蛋白是否具有钾离子吸收转运活性，简单高效。

▶本司有钾离子转运活性检测所需的全部试剂、菌株和载体。

服务流程

文案展示

ZmHAK5 and ZmHAK1 function in K⁺ uptake and distribution in maize under low K⁺ conditions

期刊：Journal of Integrative Plant Biology

Functional characterization of ZmHAK5 in yeast ZmHAK5 and AtHAK5 complement the Kþ uptakedeficient phenotype of mutant yeast strain R5421 on AP medium containing different K concentrations. Yeast strain R757 was used as a positive control. Three independent experiments were performed.

适用领域

▶钾转运蛋白功能鉴定：鉴定植物、微生物、动物来源的候选钾转运蛋白基因的体内转运功能，明确目标基因是否具备介导钾离子跨膜吸收的核心活性，是基因功能验证的关键技术手段。

▶植物逆境生理研究：解析作物在缺钾、重金属胁迫等逆境下，钾转运蛋白在维持细胞内钾离子稳态中的作用；筛选耐低钾或钾高效利用的作物基因，为养分高效利用育种提供靶点。

▶微生物钾代谢机制解析：研究细菌、真菌等微生物的钾转运系统，明确钾转运蛋白在微生物适应钾匮乏环境、维持酶活性（如钾超氧化物歧化酶）中的调控机制。

▶钾转运蛋白突变体/变体功能筛选：对钾转运蛋白的不同突变体、等位变体进行功能验证，评估氨基酸位点突变对转运活性的影响，助力蛋白结构 - 功能关系研究。