|
|
研究背景 砷是一类致癌物,全球数亿人受砷污染土壤/地下水威胁,水稻作为亚洲主粮,是人群膳食砷暴露的主要来源。砷酸根(AsV)与磷酸盐为化学类似物,共用水稻Pht1家族转运体,此前调控相关基因易破坏磷吸收、导致减产;转基因培育低砷水稻受地域政策限制,现有基因编辑靶点(如OsLsi2)存在硅吸收受损、抗逆性下降的缺陷。同时,稻田根际因氧气释放等存在一定量AsV,但其专属转运机制尚未明确,亟需找到对磷吸收影响小、介导AsV吸收的关键基因。 实验方法 以水稻品种中花11为材料,通过转录组测序和qRT-PCR分析OsPht1;9/1;10在AsV暴露、磷胁迫下的表达模式;将该基因在磷转运体缺陷酵母EY917中表达,验证其AsV转运能力;利用CRISPR-Cas9构建OsPht1;9/1;10双突变体,同时筛选单突变体作为对照;开展水培实验检测突变体的砷吸收、转运效率及磷含量;在广州、三亚开展多年多点田间试验,测定突变体籽粒砷含量与农艺性状;此外还分析了该基因在3000份水稻中的自然变异,探索常规育种潜力。 核心结果 AsV暴露下OsPht1;10表达显著上调,两基因仅在磷充足时介导水稻AsV吸收与转运;酵母实验证实其AsV转运能力高于已知的OsPht1;4;水培条件下,双突变体地上部砷积累降低46.2-65.7%,木质部汁液砷含量降低16.5-34.8%,且磷含量无显著变化;多年田间试验中,双突变体籽粒砷含量降低19.2-47.3%,产量、锌铁锰等矿质营养均不受影响,而单突变体无显著低砷效果;同时发现OsPht1;9/1;10存在自然序列变异,为常规育种提供了基础。 研究结论 OsPht1;9/1;10是水稻AsV吸收和转运的关键基因,且对磷利用的贡献极小,二者在砷吸收中存在功能冗余;双敲除该基因是培育低砷水稻的可行策略,结合现有调控AsIII积累的靶点可全面降低水稻籽粒砷含量;该基因的自然变异为非转基因低砷水稻育种提供了可能,研究不仅完善了水稻砷积累的分子机制,也为解决全球水稻砷污染问题提供了重要的理论和实践支撑。 |